Imunomodulační účinky slin klíštěte Ixodes ricinus na hostitele a jejich úloha v přenosu patogenů. Vývoj vakcín blokujících přenos patogenů klíšťaty.
Salát J., Paesen G.C., Řezáčová P., Kotsyfakis M., Kovářová Z., Šanda M., Majtán J., Grunclová L., Horká H., Andersen J.F., Brynda J., Horn M., Nunn M.A., Kopáček P., Kopecký J., Mareš M. (2010) Crystal structure and functional characterization of an immunomodulatory salivary cystatin from the soft tick Ornithodoros moubata. Biochemical Journal 429: 103–112.
Fialová A., Cimburek Z., Iezzi G., Kopecký J. (2010) Ixodes ricinus tick saliva modulates tick-borne encephalitis virus infection of dendritic cells. Microbes and Infection 12: 580–585.
SKALLOVÁ A., IEZZI G., AMPENBERGER F., KOPF M., KOPECKÝ J. (2008) Tick saliva inhibits dendritic cell migration, maturation and function, while promoting development of Th2 responses. Journal of Immunology 180: 6186-6192.
SALÁT J., JELÍNEK J., CHMELAŘ J., KOPECKÝ J. (2008) Efficacy of gamma interferon and specific antibody for treatment of microsporidiosis caused by Encephalitozoon cuniculi in SCID mice. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 52: 2169-2174.
CHMELAŘ J., KOPECKÝ J., ANDERSON J.M., VALENZUELA J.G., JOCHIM R.C., MU J. (2008) Insight into the sialome of the castor bean tick, Ixodes ricinus. BMC Genomics 20: 233-0.
Vliv klíštěcích slin na dendritické buňky
Abychom rozšířili znalosti o vlivu slin klíštěte I. ricinus na dendritické buňky (DC), studovali jsme vliv slin na dozrávání a migraci DC a na DC zprostředkovaný priming a polarizaci naivních CD4+ T lymfocytů. Klíštěcí sliny inhibovaly maturaci DC indukovanou TLR ligandami in vitro i maturaci indukovanou dibutyl ftalátem (DBP) in vivo. Užitím citlivého primovacího systému in vitro jsme ukázali, že sliny signifikantně potlačují produkci IFN-gama a IL-17 a zvyšují produkci IL-4 transgenními CD4+ T buňkami. Navíc, na rozdíl od kontrol, v kulturách naivních transgenních CD4+ T buněk s DC stimulovanými slinami in vivo výrazně převažovaly Th2 buňky nad Th1 subpopulací. Klíštěcí sliny také inhibovaly časnou fázi DBP-indukované migrace DC z kůže do spádových lymfatických uzlin. Naše výsledky ukazují komplexní účinky klíštěcích slin na funkci a fenotyp dendritických buněk, což může představovat klíčový mechanismus kterým klíšťata unikají imunitnímu dozoru.
Cystatin ze slinných žláz klíštěte Ornithodoros moubata (OmC2)
Rekombinantní OmC2 byl skrínován proti panelu fyziologicky relevantních peptidáz a bylo zjištěno, že je široce specifickým inhibitorem cysteinových katepsinů včetně endopeptidáz (katepsin L a S) a exopeptidáz (katepsin B, C a H). Byla zjištěna krystalová struktura OmC2 při rozlišení 2,45 A a byla využita ke zjištění závislosti inhibiční aktivity na struktuře. Potenciální biologický efekt OmC2 na interakci hostitel-parazit byl demonstrován ve dvou typech pokusů. Za prvé OmC2 měl imunomodulační aktivitu in vitro: ovlivňoval funkci antigen-prezentujících myších dendritických buněk snížením produkce prozánětlivých cytokinů TNF-alfa a IL-12 a snížením proliferace antigen-specifických CD4+ T buněk. Za druhé, imunizace myší OmC2 průkazně snížila přežití klíšťáků O. moubata v infestačních pokusech.
Interakce borelií s makrofágy
Byl studován vliv extraktu ze slinných žláz (SGE) a slin z klíštěte I. ricinus na interakci spirochét B. afzelii s myšími mikrofágy a na boreliacidní účinky telecího séra. SGE snížil jak počet fagocytujících buněk, tak fagocytovaných bakterií. Též byl pozorován inhibiční efekt SGE na zabíjení spirochét aktivací alternativní dráhy komplementu. Jak SGE, tak sliny snižovaly produkci prozánětlivého cytokinu TNF-alfa makrofágy stimulovanými IFN-gama a živými spirochétami B. afzelii. SGE a sliny měly odlišný vliv na produkci oxidu dusnatého stimulovanými makrofágy. Zatím co SGE upreguloval produkci NO, sliny ji snižovaly.
Slinami aktivovaný přenos B. burgdorferi
Pomocí Real.Time PCR jsme prokázali akcelerační účinky SGE nebo slin na proliferaci B. burgdorferi v myší kůži a dalších orgánech (srdce, močový měchýř). Prevalence spirochét v klíšťatech infikovaných sáním na myších byly více než desetkrát vyšší, když byly myši infikovány směsí spirochét a slin nebo SGE ve srovnání se spirochétami samotnými. Přítomnost SGE v infekčním inokulu zvýšila množství spirochét na klíště z nuly na 28.000. Tyto výsledky ukazují časné účinky klíštěcích slin na proliferaci a distribuci borelií v hostiteli, zřejmě z důvodu ovlivnění hostitelských mechanismů přirozené imunity klíštěcími slinami.
SAT aktivita klíštěcích cystatinů
Sialostatin L2 z klíštěte I. scapularis akceleroval proliferaci spirochét B. burgdorferi v případě, že byl injikován společně s patogenem. Byl zaznamenán čtyřnásobný nárůst počtu spirochét v inokulačním místě (kůže). Sialostatin L2 je zřejmě druhým dosud poznaným SAT faktorem.
Pro porovnávací studie jsou helmintologům z různých zemí k dispozici rozsáhlé sbírky...
